结核分支杆菌HSP65 DNA疫苗的制备和重组蛋白的原核表达
北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室
- 摘 要：
- 结核分支杆菌分子量为 65ku的热应激蛋白 (HSP65)是一种非常重要的抗原 ,为了研制结核病核酸疫苗 ,构建编码HSP65DNA ,并将其分别克隆到原核和真核载体中进行了表达。以标准结核分支杆菌H3 7Rv基因组DNA为模板 ,用PCR法扩增出HSP65基因 ,经限制性内切酶消化后 ,插入真核表达载体pJW43 0 3中 ,获得重组质粒pJW HSP65。同时将HSP65基因插入原核表达载体pET 2 2b(+) ,获得重组质粒pET2 2b HSP65。将pET2 2b HSP65重组质粒转化大肠杆菌蛋白酶缺陷型菌株BL2 1 (DE3 ) /PolysS ,用IPTG诱导 ,进行蛋白表达。结果表明 ,经酶切鉴定和序列测定证实插入片断为目的基因HSP65,构建成功了真核重组质粒pJW HSP65即可作为结核病DNA疫苗。经SDS PAGE检验证明可以在大肠杆菌细胞中高效表达 ,将表达蛋白进行纯化 ,作为保护性结核杆菌抗原以便检测HSP65DNA疫苗的免疫效果
关键词：结核分支杆菌;HSP65DNA疫苗;表达与纯化
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