猪链球菌3种毒力因子多细胞表位靶向DC重组蛋白DC3pep-SDZ的构建及安全性检测
天津农学院动物科学与动物医学学院/天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室;天津市动物疫病预防控制中心
- 摘 要:
- 为了研制2、3、9型猪链球菌(SS)通用的重组亚单位疫苗,本研究通过生物信息学软件对SS分泌型核酸酶A(SsnA)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH)、锌转运蛋白(ZnuA)3种毒力因子的蛋白质一级结构、B细胞及辅助T(Th)细胞抗原表位、亲疏水性及抗原性、二级结构进行综合分析后,预测获得了 SsnA、DLDH和ZnuA具有亲水性和较好抗原性的B/Th细胞表位,将它们与12聚体树突状细胞靶向肽(DC3pep)序列串联后获得了重组氨基酸序列DC3pep-SDZ.经蛋白质理化分析DC3pep-SDZ分子质量约为44ku,理论等电点(pI)为4.65,平均亲水性为-0.462,为亲水性蛋白.由生物公司构建重组原核表达载体pET28a-DC3pepSDZ,转化感受态细胞后经IPTG诱导表达后经western blot鉴定重组蛋白以可溶形式表达.表达产物利用亲和层析镍柱纯化,SDS-PAGE结果显示得到44 ku的纯化目的蛋白,纯化浓缩后经BCA蛋白浓度测定试剂盒检测,浓度为5.60 mg/mL.利用不同浓度纯化重组蛋白对2%猪红细胞悬液进行体外溶血试验,并对PK15、IPEC-J2细胞进行毒性试验,检测重组蛋白的生物安全性.体外溶血试验结果显示在5 μg/mL~500 μg/mL浓度范围内,DC3pep-SDZ蛋白对2%猪红细胞悬液溶血率低于5%;细胞毒性试验结果显示经500 μg/mL DC3pep-SDZ蛋白孵育后,PK15与IPEC-J2细胞的相对增殖率(RGR)分别为98.5%和99.6%,与对照组RGR相比均无显著差异.表明,重组蛋白无明显毒性作用.本实验首次构建并表达了重组蛋白DC3pep-SDZ,该蛋白生物安全性良好,为后续分析其免疫保护效果、研发2、3、9型SS重组亚单位疫苗奠定基础.
关键词:猪链球菌;亚单位疫苗;重组蛋白;体外溶血试验;细胞毒性
相似文章
-
纳米银对猪链球菌体外抗菌活性及其生物膜形成的影响 [刘宝玲, 李春玲, 蒋智勇, 杨冬霞, 张昆丽, 楚品品, 勾红潮, 蔡汝健] 中国畜牧兽医 2022,49 (3) 1172-1180
-
一例猪链球菌与猪传染性胸膜肺炎放线杆菌混合感染的诊治报告 [陆阔, 程家园, 张垚垚, 王嘉珍, 李郁] 养猪 2022 (3) 102-106
-
抗菌肽LL-37体外抗猪链球菌活性的研究 [金明洁, 张会会, 梁思宇, 张跃灵, 谢芳, 刘思国] 中国预防兽医学报 2022,44 (4) 423-427
-
猪链球菌细菌素的筛选及理化特性分析 [王凌利, 杨亲, 祝瑶, 杨文琳, 曹俊, 刘思国, 张万江] 中国预防兽医学报 2022,44 (4) 363-368,376
-
安徽某猪场猪链球菌9型的分离与鉴定 [唐正露, 王嘉珍, 陈阳露, 李郁] 养猪 2022 (3) 107-111
-
猪链球菌临床分离株对四环素类抗生素的耐药性和耐药基因分析 [刘宝玲, 楚品品, 李春玲, 杨冬霞, 蒋智勇, 张昆丽, 宋帅, 勾红潮, 蔡汝健] 中国畜牧兽医 2022 (7) 2796-2804
-
猪链球菌3型疫苗候选菌株筛选及3+9型二价灭活疫苗对小鼠免疫效果评估 [李倩倩, 龙云志, 梁巩, 金清, 刘锦锦, 杨柳, 黄英, 余道兵, 宋文博, 黄超, 汤细彪] 中国畜牧兽医 2022,49 (6) 2307-2317
-
重庆屠宰场猪链球菌感染的调查 [都玉, 刘召颖, 彭泽仁, 吴宗福] 畜牧与兽医 2022,54 (6) 58-65
-
前噬菌体对猪链球菌毒力、环境适应性、耐药性及代谢活动的影响 [韩雪姣, 李亮, 占松鹤, 段倩倩, 崔丽荣, 刘雪兰, 孙裴, 魏建忠, 李郁] 畜牧兽医学报 2022,53 (1) 290-303
-
potA基因缺失对猪链球菌2型生物学特性及致病性影响的研究 [刘万全, 郑立红, 刘丹, 梅庆步, 张明龙, 张春艳] 中国预防兽医学报 2022,44 (1) 9-15,40