超声波处理花粉介导‘黄花’梨遗传转化体系的建立

马倩倩;宋跃;孙毅;张绍铃;崔贵梅

山西省农业生物技术研究中心;南京农业大学梨工程技术研究中心山西省农业科学院生物技术研究中心;南京农业大学园艺学院;南京农业大学梨工程技术研究中心

摘  要：

【目的】建立超声波处理‘黄花’梨花粉介导插入外源基因的技术体系。【方法】以‘黄花’梨花粉为试材,检测不同蔗糖溶液中梨花粉破损率;通过中心组合设计方法,对超声波处理功率、处理时间、间隙时间、处理次数4个因子进行优化;利用含荧光蛋白基因的表达载体pCAMBIA 1304检测转化效率。【结果】梨花粉的适宜等渗溶液为15g.L-1蔗糖溶液。超声波处理的梨花粉受体最佳参数为:超声波处理功率160~170 W,处理时间6~7 s,间隙时间7 s,处理次数7次。采用加入含GFP(green fluorescent protein)基因的pCAMBIA 1304表达载体质粒检测优化的超声波处理组合,梨花粉外源基因的插入效率为3%。【结论】研究确定了超声波处理‘黄花’梨花粉遗传转化体系。

关键词：‘黄花’梨;花粉介导;超声波处理;转化体系;GFP基因