植物乳杆菌KLDS1.0391 PurR和PurL蛋白的原核表达、纯化及其与细菌素合成启动子的相互作用

李欣芮;赵桉;范小飘;高文文;尚佳萃;赵鹏昊;赵乐;周雪;孟祥晨

乳品科学教育部重点实验室

摘  要：

通过体外实验探究purR、purL基因对植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）KLDS1.0391细菌素合成是否具有直接调控作用。基于植物乳杆菌KLDS1.0391全基因组序列,通过聚合酶链式反应扩增得到PurR和PurL蛋白的编码基因,构建原核表达载体,将重组质粒导入大肠杆菌M15中进行诱导表达,采用镍柱亲和层析法纯化得到目的蛋白,透析后超滤浓缩,通过凝胶阻滞实验以及生物膜干涉技术研究两种蛋白与菌株细菌素合成调控区域是否具有结合作用。结果表明,PurR蛋白以可溶性蛋白形式存在,PurL蛋白以包涵体蛋白形式存在,纯化后经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示条带单一,达到电泳纯,经过浓缩后Pur R蛋白质量浓度为0.74 mg/m L,Pur L蛋白质量浓度为3.8 mg/m L。凝胶阻滞实验以及生物膜干涉技术结果表明,2个重组蛋白与菌株细菌素合成基因的启动子在菌体外无直接的结合作用,对于两种蛋白对细菌素合成的调控是否属于间接调控作用以及在菌体内的调控情况,需进一步研究。

关键词：PurR;PurL;植物乳杆菌;细菌素;凝胶阻滞;生物膜干涉技术;