毛白杨4-CLcDNA的克隆、表达及活性分析
中国农业科学院油料作物研究所;中国农业科学院油料作物研究所^中国农业科学院油料作物研究所^中国科学院遗传与发育生物学研究所^中国农业科学院油料作物研究所^中国农业科学院油料作物研究所武汉430062^武汉430062^北京100101^武汉430062^武汉430062
- 摘 要：
- 从毛白杨(Populustomentosa)木质化茎中提取总RNA,利用RT-PCR技术进行cDNA扩增,获得1条1621bp的片段。测序结果表明:该片段编码536个氨基酸组成的多肽,序列中包含所有已知4-CL蛋白的2个特征序列boxⅠ(SSGTTGLPKGV)和boxⅡ(GEICIRG)。将cDNA克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,并转化大肠杆菌(Escherichiacoli)感受态细胞BL21(DE3)。IPTG诱导后,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,4-CL基因在大肠杆菌BL21中获得表达,所表达融合蛋白的分子量约为70ku。酶活性分析表明:该重...
关键词：毛白杨;4-香豆酰辅酶A连接酶;原核表达;偏爱性
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