马铃薯类病毒cDNA双体探针的研制及其在检测上的应用
黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所农业部脱毒马铃薯种薯质量监督检验测试中心
- 摘 要：
- 在马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)基因组中BamHⅠ位点处(87~92nt),设计两对含有BamHⅠ重叠区(overlop)的引物。将PCR扩增获得的全长PSTVd分别插入到pGM-T载体中。通过BamHⅠ位点,将两个PSTVd单体连接,构建了PSTVd双体载体。以此载体为模板,通过PCR标记技术,制备了高灵敏高专化的PSTVd双体cDNA地高辛标记探针。以CDP-Star为反应底物进行化学发光反应结果判读,建立了PSTVd的高效杂交检测体系。该体系可以对马铃薯薯块、叶片、芽等不同组织样品进行检测,检测灵敏度达到0.05pg。通过对67份田间采集的样品和实验室保存的资源材料进行检测,比较了cDNA双体探针核酸斑点杂交技术(nucleic acid spot hybridization,NASH)、反转录聚合酶链式反应(reverse-transcriptional polymerase chain reaction,RT-PCR)和往返-聚丙烯酰胺凝胶电泳(return-polyacrylamide gel electrophoresis,R-PAGE)检测技术的阳性样品检出率,结果显示,NASH技术阳性样品检出率为67.7%,与RT-PCR相一致,高于R-PAGE技术的阳性检测率(53.7%)。
关键词：马铃薯;马铃薯纺锤块茎类病毒;探针;双体;核酸斑点杂交
相似文章
-
高寒阴湿地区马铃薯生产全程机械化示范推广研究 [马飞] 农家参谋(种业大观) 2022 (11) 87-89
-
除草剂对马铃薯不同品种的安全性研究 [李晓蓉, 胡冠芳, 牛树君, 王玉灵, 赵峰, 许维诚, 付克和] 中国马铃薯 2022 (1) 45-54
-
马铃薯连作障碍及其防控的研究进展 [丁凯鑫, 王立春, 单莹, 田国奎, 王海艳, 李风云, 潘阳, 庞泽, 史乔丹] 中国马铃薯 2022 (1) 71-77
-
内蒙古9种马铃薯主栽品种对黑胫病抗性评价 [张竞丹, 孙平平, 张佳, 张磊, 吕文霞, 马强, 李正男] 中国马铃薯 2022 (1) 55-62
-
浅埋滴灌模式下马铃薯品种比较试验 [薛鑫海, 陈煜林, 李慧成, 冯紫荟, 林团荣, 丘智晃, 邓兰生] 中国马铃薯 2022 (1) 1-11
-
马铃薯新品种'丽薯14号'的选育 [和平根, 和习琼, 和生鼎, 石涛, 王菊英, 李光达, 方子松] 中国马铃薯 2022 (1) 92-94
-
"花生-晚稻-马铃薯"三熟轮作种植模式的特点及栽培技术 [陈燕琼] 南方农业 2022,16 (8) 4-6
-
施钾量对宁夏旱区马铃薯产量和品质的影响 [杨永森, 杨亚亚, 吴娜, 刘吉利, 者永清, 满本菊, 麻仲花] 甘肃农业大学学报 2022 (2) 36-42
-
马铃薯与枸杞嫁接愈合过程的解剖学观察 [祁利潘, 李越, 王磊, 冯琰, 王宽, 尹江, 郭华春] 园艺学报 2022,49 (4) 868-874
-
秸秆带状覆盖对旱地马铃薯叶片抗氧化特性的影响 [黄金文, 杨成存, 韩凡香, 包正育, 柴守玺, 程宏波, 马建涛, 黄彩霞, 逄蕾, 常磊] 干旱地区农业研究 2022,40 (3) 20-29
