染料法实时荧光PCR检测牛嵴病毒
河南省农业科学院畜牧兽医研究所河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室郑州市兽医生物信息重点实验室;河南牧业经济学院动物医药学院;山东省农业科学院畜牧兽医研究所
- 摘 要：
- 牛嵴病毒（BKoV）可能是与犊牛腹泻相关的潜在病原,为建立快速检测BKoV的方法,本研究根据BKoV 3D基因的保守序列,设计特异性引物对,通过优化反应条件和体系,建立了基于Eva Green染料检测BKoV的实时定量PCR方法。该方法 Ct值与模板在1.08×102～1.08×108copies/μL范围内线性关系良好,扩增效率为106.4%;该方法仅检测BKoV时结果呈阳性,检测其他犊牛腹泻相关病原时结果呈阴性;能检出BKoV的最低检出限为10.8 copies/μL;批内和批间的变异系数均小于2%,重复性好。用该方法对311份采自河南、山东和四川省的犊牛腹泻样本进行检测,河南省BKoV的检出率为7.38%（20/271）,其他两省的样本均未检测出BKoV。本研究建立的方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,为BKoV的检测和流行病学调查提供了有力手段。
关键词：牛嵴病毒;犊牛腹泻;EvaGreen染料;
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