日本沼虾MT基因克隆、组织差异性表达及与饲料铜、锌含量的相关性
湖州师范学院生命科学学院;华东师范大学生命科学学院
- 摘 要：
- 为了更全面理解日本沼虾(Macrobrachium nipponense)的铜/锌营养生理作用,研究利用RACE技术从日本沼虾肝胰腺中克隆获得一金属硫蛋白基因c DNA全长(mn-MT),并对该基因分子特征、组织表达谱和饲料铜/锌水平对其表达的影响进行分析。结果显示:(1)mn-MT c DNA全长665 bp,含编码59个氨基酸的180 bp的开放阅读框,预测该多肽的理论分子量为6.085 k D,等电点为7.73。该蛋白中半胱氨酸含量最高(30.5%),其次是赖氨酸(16.95%)和丝氨酸(10.17%)。相似性分析显示mn-MT氨基酸序列与美洲海螯虾、斑节对虾和中华绒螯蟹MT的相似性分别达到78%、75%和75%。(2)q RT-PCR分析显示,mn-MT m RNA在肝胰腺、血细胞、鳃、胃、卵巢、肠和肌肉中都有表达,其中肝胰腺中表达量最高。(3)用4组铜添加量分别为0、20、40及160 mg/kg的饲料和3组锌添加水平分别为0、35和210 mg/kg的饲料饲喂初重为(0.101±0.002)g日本沼虾56d后,分析各组虾肝胰腺的mn-MT m RNA表达。mn-MT m RNA表达随饲料铜水平的提高而升高,到40 mg/kg组达到最高(P<0.05),而后开始下降;饲料中高锌(210 mg/kg)显著提高mn-MT表达(P<0.05),0和35 mg/kg组间差异不显著(P>0.05)。结果表明饲料中铜/锌均可影响mn-MT表达,且呈现不同的剂量依赖效应。
关键词：日本沼虾;金属硫蛋白;铜;锌;mRNA表达
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