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Position: Home > Articles > CRISPR/Cas9技术在天目地黄RcPDS1基因编辑中的应用 Acta Horticulturae Sinica 2022 (7) 1532-1544

CRISPR/Cas9技术在天目地黄RcPDS1基因编辑中的应用

作  者：
左鑫;李铭铭;李欣容;苗春妍;李炎枋;杨旭;张重义;王丰青
单  位：
;河南农业大学农学院;福建农林大学农学院
关键词：
天目地黄;CRISPR/Cas9;Rc PDS1;基因编辑;
摘  要：
为了研究CRISPR/Cas9技术在天目地黄基因编辑中的应用，克隆了天目地黄（Rehmannia chingii）的八氢番茄红素脱氢酶基因（Rc PDS1），利用PCR方法扩增其c DNA序列和基因组DNA序列。通过构建单靶点CRISPR/Cas9载体，利用根癌农杆菌介导的遗传转化方法侵染天目地黄无菌苗叶盘，通过TA克隆测序法分析基因编辑的类型。结果显示，克隆获得了1个天目地黄Rc PDS1的全长c DNA序列，其具有1个长度为1 743 bp的开放阅读框，编码580个氨基酸残基，基因组DNA序列长度8 041 bp，包含14个内含子和15个外显子。通过遗传转化共获得57个转基因再生株系，其中具明显白化表型的株系有20个（35.09%）。TA克隆测序结果显示，Rc PDS1靶位点突变类型主要包括碱基缺失、替换和插入。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在天目地黄中成功实现了对Rc PDS1基因的靶向敲除。

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