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猪β-防御素-2在黄曲霉毒素B1致仔猪空肠上皮细胞炎症反应中的作用

作者：

李庆豪;张曼;孙娟;彭雅婷;刘勇;金鑫;李奎

单位：

郑州大学第三附属医院;河南牧业经济学院动物医药学院;河南农业大学动物医学院

关键词：

猪β-防御素-2;黄曲霉毒素B1;IPEC-J2细胞;炎症反应;

摘要：

以仔猪空肠上皮细胞（IPEC-J2）为模型，探究猪β-防御素-2（porcineβ-defensin 2,pBD-2）在黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）致细胞炎症反应中的作用。使用CCK-8法确认不同质量浓度（20,40,60,80,100 mg/L）AFB1及不同质量浓度（2,4,6,8,10 mg/L）pBD-2的细胞毒性，筛选两者的可用质量浓度，再通过qPCR确认不同质量浓度（10,20,30,40,50 mg/L）的AFB1对IPEC-J2细胞TNF-αmRNA及IL-1βmRNA表达的影响，建立AFB1致细胞损伤模型。然后分别以2,4,6,8 mg/L pBD-2处理细胞损伤模型作为试验组，同时分别以单独使用AFB1和pBD-2处理的细胞作为阳性对照组和阴性对照组，未经任何处理的细胞作为空白对照组，所有细胞处理均进行12 h。处理结束后提取所有组细胞总RNA和总蛋白，使用qPCR及Western blot检测TNF-α及IL-1β的表达变化。细胞存活率检测结果显示，与空白对照组相比，60 mg/L及更高剂量AFB1组细胞存活率显著降低（P<0.05）;pBD-2在10 mg/L出现细胞毒性，细胞存活率显著低于空白对照组（P<0.05）。细胞损伤模型建立结果显示，与空白对照组相比，AFB1在30 mg/L时显著上调了TNF-αmRNA和IL-1βmRNA的表达（P<0.05）。使用pBD-2处理细胞损伤模型，qPCR结果显示，4,6 mg/LpBD-2可显著下调AFB1所致TNF-αmRNA及IL-1βmRNA的过量表达至空白对照组水平（P<0.05）;Western blot结果显示，AFB1显著上调TNF-α及IL-1β的表达后（P<0.05）,8 mg/L pBD-2可下调TNF-α的表达至显著低于空白对照组水平（P<0.05）,6,8 mg/L pBD-2可显著下调IL-1β的表达至空白对照组水平（P<0.05）。结果表明，pBD-2可通过调控细胞炎性因子的表达来缓解AFB1对小肠上皮细胞造成的炎症反应。

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