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半滑舌鳎CsNLR-C6和CsNLR-C7基因的克隆及免疫应答分析

作  者:
陈张帆;王洁;徐锡文;周茜;陈松林
单  位:
中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室
关键词:
半滑舌鳎;模式识别受体;NOD样受体;哈维氏弧菌;
摘  要:
为了解NOD样受体家族(NLR)对鱼类免疫反应的作用,对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)中两个鱼类特有的NLR-C基因CsNLR-C6和CsNLR-C7进行序列克隆、系统进化分析和表达模式检测。两个基因的开放阅读框(ORF)分别为3 324 bp和2 961 bp,编码1 078和987个氨基酸。CsNLR-C6和CsNLR-C7蛋白均含有N末端的FISNA结构域、保守的中心NACHT结构域、C末端的B30.2(PRY/SPRY)结构域。经蛋白序列系统进化分析,CsNLR-C6、CsNLR-C7与其他鱼类的NLR-C聚为一支,并与NOD3亚家族的进化关系较为接近。实时荧光定量PCR结果显示,CsNLR-C6和CsNLR-C7基因在半滑舌鳎健康组织中有广泛表达,其中,CsNLR-C6在鳃、肠、皮肤、脾中有较高表达,而CsNLR-C7在鳃、头肾、肝中有较高表达。两个基因在不同组织中对哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的响应模式不同:在肠、肾脏、脾中,CsNLR-C6和CsNLR-C7基因在感染12~48 h内表达量升高;在鳃中,CsNLR-C6表达量在感染24 h后升高;在肝中,CsNLR-C7表达量在感染48 h后升高。结果表明,CsNLR-C6和CsNLR-C7在半滑舌鳎抵御哈维氏弧菌病的免疫应答中发挥作用,这为半滑舌鳎抗哈维氏弧菌病的分子机制研究和鱼类NLRs的功能研究奠定基础。

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