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禽呼肠孤病毒σB基因在杆状病毒表达系统中的表达与鉴定

作  者:
王盛;谢芝勋;沈文康;谢丽基;范晴;罗思思;张艳芳;曾婷婷;黄娇玲;张民秀;谢志勤;邓显文
单  位:
广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室
关键词:
禽呼肠孤病毒;σB基因;杆状病毒表达系统;sf9细胞
摘  要:
本研究旨在通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达具有生物学活性的禽呼肠孤病毒σB蛋白.首先,根据NCBI中ARVσB基因序列,设计引物构建σB基因重组供体质粒pFast-σB.随后转化DH10bac感受态细胞,筛选获得重组穿梭质粒Bacmid-σB.通过脂质体介导法转化sf9细胞,获得重组杆状病毒rBac-σB.将重组病毒感染sf9细胞,表达重组蛋白.通过SDS-PAGE、Western-blot和间接免疫荧光(IFA)检测表明,ARVσB蛋白在sf9细胞中成功表达,分子量约为41 ku,并具有良好的生物学活性,为进一步研究ARVσB基因的功能及其基因工程亚单位疫苗的研究奠定了基础.

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