叶片淀粉的分离与纯化方法可以划分为以下9个步骤。

（1）叶片磨粉。水稻叶片淀粉作为临时淀粉，经过白天的合成与积累，在18：00含量较高^［8］。因此，本研究采取白天18：00的水稻绿色叶片，用清水洗净后晾干，加入液氮利用研钵研磨成细粉，冻干机中过夜冻干。

（2）裂解细胞。称取20 g研磨好的叶片粉末于500 mL烧杯中，加入250 mL浓度为0.2%的NaOH溶液，在磁力搅拌机上缓慢搅拌1 h，7 000×g离心10 min收集沉淀。

（3）淀粉释放。加入250 mL的淀粉提取液（20 mmol/L HEPES-KOH，pH 8.0，0.2 mmol/L乙二胺四乙酸和0.5%（V/V）曲拉通x-100）悬浮收集的沉淀，磁力搅拌机上缓慢搅拌1 h，7 000×g离心10 min收集沉淀。

（4）过筛。将收集的沉淀用250 mL蒸馏水悬浮混匀，先用4层纱布过滤掉大的细胞碎片，接着过100目筛网后收集滤液，最后过400目的筛网收集滤液，将滤液7 000×g离心10 min收集沉淀。过100目和400目筛网时可以用吸管反复吹打筛网上的淀粉悬液，促进淀粉颗粒过筛。

（5）杂质去除。用250 mL的0.2%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液悬浮沉淀，磁力搅拌机缓慢搅拌1 h，7 000×g离心10 min收集沉淀，接着用100 mL的HEPES-KOH（50 mmol/L，pH=7.2）悬浮沉淀，磁力搅拌机缓慢搅拌1 h，7 000×g离心10 min收集沉淀。

（6）静置沉降。加入100 mL蒸馏水悬浮混匀沉淀，分装到2个50 mL离心管中，放置在离心管架子上，4℃静置10 h，小心吸取含有淀粉颗粒的白色上清溶液至新的离心管；剩下的沉淀再次用40 mL蒸馏水悬浮并且混匀，继续4℃静置8 h，小心吸取白色上清溶液至新的离心管；剩下的沉淀再次用30 mL蒸馏水悬浮并混匀，继续4℃静置6 h，小心吸取白色上清溶液至新的离心管。将3次沉降不同时间收集的上清液混在一起，7 000×g离心10 min收集沉淀。每次沉降后都会看到绿色沉淀在管底，吸取上清时要尽量小心不要吸到沉淀。

（7）水洗淀粉。利用50 mL蒸馏水悬浮清洗沉淀，7 000×g离心10 min收集沉淀，重复洗涤3次。

（8）乙醇脱水。利用100%乙醇悬浮沉淀，静置30 min，7 000×g离心10 min收集沉淀，重复脱水2次。

（9）烘干保存。将沉淀置于40℃烘箱摊开烘干，过100目筛网，干燥保存备用。