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苹果愈伤组织CRISPR/LbCpf1基因编辑体系的建立

作  者:
刘杨;张春玲;肖旭;由春香;王小非
单  位:
山东农业大学园艺科学与工程学院/作物生物学国家重点实验室/国家苹果工程技术研究中心
关键词:
苹果;愈伤组织;基因编辑;CRISPR/Cpf1
摘  要:
为在苹果愈伤组织中建立CRISPR/Cpf1基因编辑体系,构建双靶点CRISPR/LbCpf1载体,靶向正调控花青苷积累的苹果MdMYB1转录因子基因。转化王林愈伤组织,通过测序以及花青苷积累实验验证敲除效率。结果表明,CRISPR/LbCpf1在苹果愈伤组织中可实现44.4%的总突变率,其中靶点1突变率为22.2%,靶点2为33.3%。CRISPR/LbCpf1易造成2个碱基对(bp)以及7~9 bp的小片段删除,占比68.8%,在距PAM序列远端14~22 bp位置发生突变概率较高,符合典型CRISPR/LbCpf1体系的特点。相对于野生型,成功基因编辑的愈伤组织株系花青苷积累明显减少,综上说明CRISPR/LbCpf1体系可在苹果愈伤组织中实现较高效的基因编辑。

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