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马MHC-I-B2蛋白对马疱疹病毒1型胞内复制影响的研究

作  者:
郑学功;刘建华;孙佳琪;车传忠;祖力亚江·阿不都热合曼;冉多良
单  位:
新疆农业大学动物医学学院
关键词:
马疱疹病毒1型;马MHCⅠ类分子;细胞
摘  要:
为探明马MHC-I-B2蛋白对马疱疹病毒1型(EHV-1)胞内复制的影响,本研究合成马MHC-I-B2基因,并将其克隆至慢病毒表达载体,构建重组质粒pLVML-HA-MHC-IRES-Puro.利用慢病毒载体系统将pSPAX2、pMAD.2G、pLVML-HA-MHC-IRES-Puro共转染HEK-293T细胞,同时共转染pLenti-GFP-N2,pSPAX2和pMAD.2G质粒作为对照组,待对照组细胞出现绿色荧光时收获各组感染后的BHK-21细胞获得相应慢病毒.将上述慢病毒感染BHK-21细胞并经嘌呤霉素筛选后将获得表达马MHC-I-B2的细胞并传20代,分别取第5、10、15、20代细胞,通过PCR检测马MHC-I-B2的重链基因序列,分析构建细胞系的遗传稳定性,并利用western blot检测第20代细胞中马MHC-I-B2重链基因的表达.结果显示,正确构建了稳定过表达马MHC-I-B2蛋白的BHK-21细胞系(BHK-21-Equus MHC-I-B2).采用EHV-1(MOI 0.1)感染BHK-21-Equus MHC-I-B2与其亲本细胞BHK-21,检测病毒滴度,结果显示BHK-21-Equus MHC-I-B2细胞病变效应(CPE)更明显,病毒滴度比其亲本细胞提高了3.2~4.4倍,可见马MHC-I-B2蛋白可显著提高EHV-1的增殖水平.本研究建立了稳定过表达马MHC-I-B2蛋白的BHK-21细胞系,并首次证实马MHC-I-B2蛋白对EHV-1的增殖具有促进作用,为今后EHV-1的感染机制研究奠定物质基础.
译  名:
Study on the effect of equine MHC-I-B2 protein on intracellular replication of equine herpes virus type 1

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