聂利珍;孙瑞芬;房永雨;李晓东;孙杰;韩平安

内蒙古自治区农牧业科学院草原研究所;内蒙古自治区农牧业科学院生物技术研究中心

紫花苜蓿（Medicago sativa）;脱水素基因;诱导型启动子;转基因;

为获得抗逆性强、生长正常的转基因紫花苜蓿植株,本研究以野生型拟南芥（Arabidopsis thaliana）和蒙古沙冬青（Ammppiptanthus mongolicus）为材料,利用PCR和DNA重组技术,克隆了拟南芥Rd29A基因ATG上游共1 520 bp的启动子区域;克隆了蒙古沙冬青脱水素基因（AmDHN）共572 bp的开放阅读框,构建了Rd29A启动子驱动AmDHN基因表达的植物表达载体pCHF-RD-DHN。以紫花苜蓿（Medicago satiua）品种‘敖汉苜蓿’的下胚轴和子叶为受体材料,利用农杆菌介导法,将构建的pCHF-RD-DHN表达载体转入‘敖汉苜蓿’中,经筛选获得了抗性再生植株。通过PCR检测显示,Rd29A启动子驱动的AmDHN基因已转入‘敖汉苜蓿’的基因组中。利用20%PEG模拟干旱胁迫后,经RT-PCR分析证实,当用20%的PEG胁迫转基因苜蓿植株时,转基因苜蓿株系中AmDHN基因表达量明显增强,而在水处理的条件下,转基因植株中AmDHN基因微量表达。本研究结果将为逆境诱导型启动子驱动抗逆基因在牧草中的表达研究及其遗传改良提供依据。