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Biotechnology Bulletin
2012
(5)
含非竞争性内标四重荧光RT-PCR方法检测手足口肠道病毒方法的研究
作 者：
周冬根;孙大为;王燕;倪敏君;张升;翟敏
单 位：
浙江省宁波出入境检验检疫局
关键词：
四重荧光RT-PCR;非竞争性内标;手足口;肠道病毒;检测
摘 要：
旨在了解手足口病的流行和感染情况,并进行快速准确的检测.建立了含非竞争性内标的同时检测肠道病毒通用型、肠道病毒EV71型及柯萨奇病毒CA16型的四重荧光RT-PCR方法,对该方法的特异性、灵敏度等进行评价,并对多份临床样本进行应用检测.结果表明,该检测方法特异性强,对肠道病毒及其他人类非肠道病毒进行检测,显示了良好的特异性;该检测方法对EV71型和CA16型的检测是敏度分别达到31.25TCID50和1.25*102 TCID50;将浓度为l*104 TCID50及5*102 TCID50的EV71样本进行重复性试验,其变异系数均小于1.5%;将浓度为5*102-5* 105 TCID50的EV71和CA16样本进行线性试验,其相关系数R2值在0.982-0.998之间.采用本研究建立的方法检测40份疑似临床样本,最后检出31份肠道病毒阳性样本,其中8例EV71型阳性,13例CA16阳性.另外,试验数据表明,内标对监控PCR抑制物的存在具有重要作用.本方法能同时快速检测所有肠道病毒并进行EV71型及CA16型的分型,并且灵敏度高、特异性好、扩增效率高,由于加入了内标,能有效地监控假阴性的出现,适合于手足口病的临床检测.
译 名：
Multiplex Real-time PCR Detection of Enteroviruses of HFMD with a Non-competent Internal Control
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