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Position: Home > Articles > Cloning of Bm91 gene of Boophilus microplus and construction of eukaryotic expression vector with Bm91 gene Journal of Gansu Agricultural University 2009,44 (1) 21-26

微小牛蜱Bm91基因的克隆及其真核表达载体的构建

作者：

王玙;曾巧英;罗建勋;马米玲;关贵全;殷宏

单位：

甘肃农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所

关键词：

微小牛蜱;Bm91基因;真核表达载体

摘要：

参照GenBank中收录的微小牛蜱Bm91基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物,从我国微小牛蜱半饱血雌性成蜱肠道和唾液腺研磨物中提取总RNA,利用M-MLV RTase cDNA Synthesis Kit合成双链cDNA,并采用PCR技术扩增获得的Bm91基因,将其克隆到pGEM-T Easy载体中并进行PCR、酶切和测序分析鉴定.结果表明:所克隆的Bm91基因序列与GenBank上收录的Bm91基因序列的同源性达97.1%,而且该片段含有完整的开放阅读框;将该基因从克隆载体上用EcoRⅠ单酶切消化并亚克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pP1C9K的EcoRⅠ酶切位点,再次进行PCR、酶切和测序分析鉴定,结果表明成功构建并获得了微小牛蜱Bm91基因的重组真核表达载体pP1C9K-Bm91.

译名：

Cloning of Bm91 gene of Boophilus microplus and construction of eukaryotic expression vector with Bm91 gene

作者：

WANG Yu1,2,ZENG Qiao-ying1,LUO Jian-xun2,MA Mi-ling2,GUAN Gui-quan2,YIN Hong2(1.College of Veterinary Medicine,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China;2.Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province,State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China)

关键词：

Boophilus microplus;Bm91 gene;recombinant eukaryotic expression vector

摘要：

The total RNA was extracted from the salivary glands and the intestine of semiengorged adult female Boophilus microplus and double cDNA was synthesized using M-MLV RTase cDNA Synthesis Kit.According to the nucleotide sequences of Bm91 published in GenBank,a pair of primers was designed and a 1 908 bp Bm91 gene was amplified by PCR.The target gene was subcloned into pGEM-T Easy vector and tested by PCR,enzyme digestion and sequencing.The sequencing showed that the cloned Bm91 gene shared 97.1 %homology with the date published in GenBank and this fragment contained the complete open reading frame of Bm91 gene.Then the gene was cleaved from pGEM-T Easy vector by EcoR Ⅰand subcloned into pPIC9K secretory expression vector of Pichia pastoris.The recombinant eukaryotic expression vector of designated pPIC9K-Bm91 was constructed successfully.

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