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Position: Home > Articles > Development of a dot-enzyme linked immunosorbent assay for detection of bovine antibody against Clostridium perfringens type D Chinese Veterinary Science 2009,39 (3) 246-250

牛D型产气荚膜梭菌肠毒血症dot-ELISA诊断方法的建立

作  者：
李云霄;金鑫;单雪梅;张营;任春宇
单  位：
延边大学农学院
关键词：
牛;D型产气荚膜梭菌;纯化抗原;斑点酶联免疫吸附试验
摘  要：
以纯化的菌体蛋白为诊断抗原,建立了牛D型产气荚膜梭菌特异性抗体的斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA)检测方法,确定了各组分的最适反应条件:抗原包被浓度为1.95μg/mL,血清稀释度为1∶320,二抗稀释度为1∶2 000,封闭液为30 mL/L脱脂乳,抗原、血清、二抗和封闭液的作用温度及时间均为37℃30 min。用该dot-ELISA检测30份牛血清,纯化抗原比粗提抗原的阳性检出率高16.7%;dot-ELISA的灵敏度是琼脂免疫扩散试验(AGID)法的43倍;用dot-ELISA法对100份牛血清样本进行检测,阳性率为59.0%;经特异性试验、重复性试验和与AGID法比较,表明用纯化抗原建立的方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。
译  名：
Development of a dot-enzyme linked immunosorbent assay for detection of bovine antibody against Clostridium perfringens type D
作  者：
LI Yun-xiao,JIN Xin,SHAN Xue-mei,ZHANG Ying,REN Chun-yu(College of Agriculture,Yanbian University,Longjing 133400,China)
关键词：
cattle;Clostridium perfringens type D;purified antigen;dot-enzyme linked immunosorbent assay
摘  要：
A dot-enzyme linked immunosorbent assay(dot-ELISA) for detection of cattle's antibody against Clostridium perfringens type D using purified antigen was developed.The optimal conditions for the dot-ELISA assay were that antigen concentration,serum dilution and dilution of the HRP-labeled rabbit anti-bovine IgG were 1.95 μg/mL,1∶320,1∶2 000,respectively and blocking agent was 30 mL/L skimmed milk at 37 ℃ for 30 min.Positive rate of 30 bovine serum samples in dot-ELISA using the purified antigen was 16.7% higher than that using the crude antigen.Sensitivity of the dot-ELISA was 43 times that of AGID.Positive rate of 100 bovine serum samples collected from Yanbian Prefecture was 59.0% by dot-ELISA.Specificity,reproducibility and comparison tests showed that dot-ELISA was specific,sensitive and reproducible.

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