赵永霞;赵昌滨;梁锦萍;李红梅

华南农业大学动物科学学院

线粒体相关基因;精氨酸酶2（ARG2）;J亚群禽白血病病毒（ALV-J）;病毒复制;DF-1细胞

为了研究线粒体相关基因精氨酸酶2（arginase-2,ARG2）在J亚群禽白血病病毒（J subgroup leukosis virus, ALV-J）感染中的作用，试验采用qRT-PCR方法分别检测感染ALV-J后试验组鸡不同器官和DF-1细胞中ARG2基因的表达情况，分析ARG2基因和ALV-J感染之间是否有联系；设计ARG2基因的过表达载体（过表达ARG2组）和干扰片段（干扰ARG2组）转染DF-1细胞，并以pcDNA3.1或Si-NC为对照，采用qRT-PCR方法检测ARG2基因的过表达和干扰效率；采用qRT-PCR、Western-blot和间接免疫荧光试验检测过表达或干扰ARG2基因后感染ALV-J的DF-1细胞中gp85基因及Env蛋白表达情况，从而综合分析ARG2基因对ALV-J复制的影响。结果表明：与对照组相比，试验组鸡的脾脏、法氏囊中ARG2基因相对表达量极显著降低（P＜0.01）,而肾脏中ARG2基因相对表达量极显著升高（P＜0.01）。同时在体外试验中，ARG2基因在感染后第6,12小时时相对表达量降低（P＞0.05或P＜0.05）,而在第24,48,74,108小时相对表达量显著或极显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。与对照组相比，过表达ARG2组ARG2基因相对表达量极显著升高（P＜0.01）,干扰ARG2组ARG2基因相对表达量降低（P＞0.05或P＜0.05）,并选择干扰片段SI-ARG2-001进行后续试验。过表达ARG2基因后，与对照组相比，过表达ARG2组第12,24小时的gp85基因相对表达量显著或极显著升高（P＜0.05或P＜0.01）,Env蛋白表达量显著上调（P＜0.05）,Env免疫荧光信号强度增强；干扰ARG2基因后，与对照组相比，干扰ARG2组第6,12,48小时的gp85基因相对表达量显著或极显著降低（P＜0.05或P＜0.01）,Env蛋白表达量显著下调（P＜0.05）,Env免疫荧光信号强度减弱。说明ARG2基因可以促进ALV-J在DF-1细胞中的复制。