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Position: Home > Articles > Construction of Tn5 insertional mutants of Pseudomonas sringae pv. tabaci by electroporation Journal of Henan Agricultural University 2010,44 (3) 322-325

利用电转化法构建烟草野火病菌的Tn5插入突变体

作者：

陈红;李江利;焦伟;蒋士君

单位：

河南农业大学植物保护学院

关键词：

烟草野火病菌;电转化;Tn5插入突变;功能突变体

摘要：

采用电转化法将含有kanr基因标记的EZ::Tn5转座子插入到烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv. tabaci)的基因组中.结果表明,在电压为2 400 V条件下,供试的烟草野火病菌菌株SMX 006及WT4的电转化效率分别为0.8×103,4.2×103cfu.μg-1DNA.转化电压下降至1 800 V时,WT4菌株的转化效率也随之下降至1.64×103cfu.μg-1DNA.对转化子进行kanr筛选以及特异性PCR鉴定,表明Tn 5可以稳定地插入到受体菌的基因组中.对烟草野火病菌SMX 006的Tn 5插入突变体进行了多次致病性、运动性和胞外蛋白酶活性测定,从中获得了2个致病力明显减弱的突变株(H028,H029)、1个运动能力明显减弱的突变株(H028)、1个运动能力丧失的突变株(H029)、1个产胞外蛋白酶能力明显减弱的突变株(H046),以及1个胞外蛋白酶缺失的突变株(H045).

译名：

Construction of Tn5 insertional mutants of Pseudomonas sringae pv. tabaci by electroporation

作者：

CHEN Hong,LI Jiang-li,JIAO Wei,JIANG Shi-jun(College of Plant Protection,Henan Agricultural University,Zhengzhou 450002,China)

关键词：

Pseudomonas sringae pv.tabaci;electroporation;Tn 5 insertional mutagenesis;functional mutant

摘要：

In this study,EZ::Tn 5 carrying kanamycin resistance gene marker was inserted into genome of Pseudomonas syringae pv.tabaci by electroporation.The results showed that,under the condition of 2 400 volt,the transformation efficiency of two tested strains,SMX 006 and WT 4,was 0.8 × 103 and 4.2 × 103 cfu·μg-1 DNA,respectively.However,the trausformation efficiency of strain WT4 was decreased accordingly to 1.64 × 103 cfu·μg-1 DNA when the voltage for transformation was decreased to 1 800 volt.Screening by specific PCR-based identification and kanamycin resistance indicated that the EZ::Tn5 could be inserted into transformants stably.By repeatable assay of pathogenicity,motility and extracellular protease secretion,some functional mutants were screened out from the EZ::Tn5 insertional library: two mutants(H 028,H 029) with significantly weakened pathogenicity;mutant H 028 with reduced swimming motility,and mutant H 029 was motility-defective;mutant H 046 with significantly decreased extracellular protease secretion,and mutant H 045 could not secrete detectable extracellular protease.

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