中国农业科学院农业信息研究所 中国农学会
Agricultural Information Institute of CAAS China Association of Agricultural Science Societies
En
Ch
中国农业科学院农业信息研究所 中国农学会 主办

AI检索

订阅

返回顶部
当前位置: 首页 > 文章 > 稳定表达猪CYP3A29基因的PAM细胞系构建及鉴定 江苏农业学报 2014 (3) 554-559
Position: Home > Articles > Establishment and identification of porcine alveolar macrophage cell line stably expressing CYP3A29 gene Jiangsu Journal of Agricultural Sciences 2014 (3) 554-559

稳定表达猪CYP3A29基因的PAM细胞系构建及鉴定

作  者：
郅西柱;方晓敏;赵芳;周艳红;涂枫
单  位：
南京农业大学动物科技学院江苏省农业科学院畜牧所;唐山职业技术学院;江苏省农业科学院畜牧研究所
关键词：
猪;CYP3A29;肺泡巨噬细胞;稳定表达细胞系
摘  要：
为获得稳定表达CYP3A29基因的猪肺泡巨噬细胞系,利用RT-PCR方法获取猪CYP3A29基因序列后与克隆载体PMD18-T相连,得到PMD18-T-CYP3A29重组质粒并测序验证,利用Xho I和Not I双酶切重组质粒及pcDNA3.1(+)/zeo,回收后连接,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)/zeo-CYP3A29,双酶切及测序验证其正确性,并以脂质体2000将其转染至猪肺泡巨噬细胞系3D4/21,经Zeocin抗性筛选,借助RT-PCR及Wesrern-blot鉴定该基因的表达情况。结果表明,成功获得表达CYP3A29的细胞株,且连续培养10代后,RT-PCR及Wesrern-blot仍能检测到该基因表达。说明,稳定表达CYP3A29基因的猪肺泡巨噬细胞系构建成功,该细胞系的成功构建为进一步研究分析猪CYP3A29基因的功能提供了可能。
译  名：
Establishment and identification of porcine alveolar macrophage cell line stably expressing CYP3A29 gene
作  者：
ZHI Xi-zhu;FANG Xiao-min;ZHAO Fang;ZHOU Yan-hong;TU Feng;LI Bi-xia;WANG Xue-min;REN Shou-wen;College of Animal Science and Technology,Nanjing Agricultural University;Institute of Animal Science,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences;
关键词：
porcine;;CYP3A29;;alveolar macrophage;;stable expression cell line
摘  要：
The cDNA of CYP3A29 gene was amplified by RT-PCR and was then subcloned into plasmid PMD18-T vector to obtain a recombinant plasmid PMD18-T-CYP3A29,which was verified by DNA sequencing. CYP3A29 gene fragments and pcDNA3. 1( +) /zeo vector fragments purified after digestion with Xho I and Not I were ligated together to generate a pcDNA3. 1( +) /zeo-CYP3A29 plasmid,which was verified by restriction enzyme digestion and DNA sequencing.The porcine alveolar macrophages cell( PAM) lines 3D4 /21 was transfected by recombinant plasmid pcDNA3. 1( +)/zeo-CYP3A29 using lipofectamine 2000. RT-PCR and Western blot detected the successful expression of CYP3A29 in PAM cells. After 10 generations,CYP3A29gene was detectable by RT-PCR and Wsetern-blot. The establishment of PAM cell lines stably expressing CYP3A29 gene enables the functions analysis of CYP3A29gene.

相似文章

导出引用
计量
文章访问数: 9
HTML全文浏览量: 0
PDF下载量: 0

所属期刊

推荐期刊

友情链接Friendly link
农业信息研究所Agricultural information institute 农业智能知识服务平台Agricultural intelligent knowledge service platform 农业学术服务平台Agricultural Knowledge Service System 中国知网CNKI 维普网VIP 万方WANFANG DATA
联系我们Contact us

电话Tell：010-82109652-808

邮箱E-mail：agrijournal@caas.cn

服务Service
关于我们About us 意见建议Opinions and suggest
版权说明Copyright
单位：中国农业科学院农业信息研究所 中国农学会 © 2017中国农业科学院农业信息研究所 ICP备案号：京ICP备09089781号-46