当前位置: 首页 > 文章 > 水牛miRNA-155重组腺病毒载体的构建及生物信息学分析 中国兽医学报 2020 (10) 1998-2006
Position: Home > Articles > 水牛miRNA-155重组腺病毒载体的构建及生物信息学分析 Chinese Journal of Veterinary Science 2020 (10) 1998-2006

水牛miRNA-155重组腺病毒载体的构建及生物信息学分析

作  者:
吴飞;沈朋雷;王露露;陈维丽;冯万有;俸云;卢嘉卡;陆凤花;石德顺
单  位:
广西亚热带生物资源保护利用重点实验室
关键词:
水牛;miR-155;卵丘细胞;生物信息学;腺病毒载体
摘  要:
旨在利用Admax系统构建miRNA-155的腺病毒表达载体,获得含有miR-155的腺病毒颗粒,同时对miR-155的预测靶基因进行生物信息学分析,为研究水牛卵丘细胞中miRNA-155的功能奠定基础.根据GenBank中牛的序列,通过RT-PCR扩增得到pri-miRNA-155序列,并连接到腺病毒载体pDC316-mCMV-EGFP,测序并进行生物信息学分析.将pDC316-mCMV-EGFP-pri-miRNA-155与pBHGloxdelE13cre在HEK-293细胞中包装获得Ad-miRNA-155病毒颗粒,感染水牛卵丘细胞后,利用RT-qPCR技术检测miRNA-155及部分靶基因表达量.TargetScan网站预测获得miRNA-155的靶基因,并利用KOBAS 3.0对预测靶基因进行GO和KEGG富集分析.结果表明,成功构建腺病毒重组载体pDC316-mCMV-EGFP-pri-miRNA-155,水牛pre-miR-155与黄牛、马、家兔、原鸡、猕猴、狼、树鼩的同源性均达95%以上,且miR-155在进化过程中高度保守.Ad-miR-155感染水牛卵丘细胞后,miR-155的表达水平显著上升(P<0.01),预测靶基因Wee1、CD44、TRPS1表达水平显著降低(P<0.01).最后对miR-155预测靶基因进行生物信息学分析发现,miR-155可能通过PI3K-AKT、mTOR及MAPK等信号通路作用于卵丘细胞进而调控水牛卵母细胞体外成熟.

相似文章

计量
文章访问数: 13
HTML全文浏览量: 0
PDF下载量: 0

所属期刊

推荐期刊