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国槐SSR-PCR反应体系的建立与优化

作  者:
张明静;庞彩红;李际红;李双云;付茵茵;哈新英;夏阳
单  位:
山东农业大学林学院;山东省林业科学研究院/山东省林木遗传改良重点实验室/黄河三角洲林木遗传育种国家林草局重点实验室;济南市城乡建设发展中心
关键词:
国槐;SSR;PCR反应体系;优化;
摘  要:
利用单因素试验结合L16(4~5)正交试验设计对国槐SSR-PCR反应体系中的5个主要影响因素(Mg2+、引物、dNTPs、ExTaq酶、模板DNA用量)进行优化,确定最佳反应体系为(10μL):25 mmol/L Mg2+1.0μL,2.5 mmol/L dNTPs 0.2μL,10μmol/L上下游引物共0.5μL,5 U/μL ExTaq酶0.05μL,30 ng/μL模板DNA 1.0μL,10×PCR Buffer 1.0μL,ddH2O 6.25μL。随机挑选4对SSR引物和8个国槐种质对试验确定的最佳反应体系进行验证,均能获得清晰、稳定的条带。该优化反应体系的建立为利用SSR标记对国槐种质资源进行深入研究和利用奠定了基础。

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