吕静;刘文波;刘畅;任同伟;陈樱;欧阳康;黄伟坚;韦祖樟

广西大学动物科学技术学院

猪CD163受体;细胞系;慢病毒载体;

为了构建稳定表达猪CD163（pCD163）受体的MARC-145细胞系，从猪肺泡巨噬细胞（PAMs）中提取总RNA,通过RT-PCR方法扩增pCD163基因，将pCD163基因克隆到慢病毒载体pLVX-IRES-mCherry中，获得重组质粒pLVX-pCD163-IRES-mCherry。将重组质粒pLVX-pCD163-IRES-mCherry与辅助质粒psPAX2、VSVG共转染293T细胞，获得具有感染能力的慢病毒粒子，使用慢病毒感染MARC-145细胞，用嘌呤霉素初步筛选阳性细胞，采用终点稀释法筛选出稳定表达pCD163受体的MARC-145细胞。通过RT-PCR扩增pCD163基因及测序分析表明细胞系基因组中存在pCD163受体编码序列，IFA和Western blot试验验证了pCD163受体蛋白在细胞系中稳定表达。用不同谱系的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GXNN1396（lineage 8）、GXNN202004a（lineage 1）、GXGG202007（lineage 3）分别感染稳定表达pCD163的MARC-145细胞系与MARC-145细胞，PRRSV毒株在表达pCD163的MARC-145细胞系中能够更快达到最高病毒滴度。结果表明，成功构建了稳定表达pCD163的MARC-145细胞系，为快速分离各种谱系PRRSV毒株和相关研究奠定了基础。