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黄鳝转铁蛋白基因的克隆及其N-lobe的重组表达

作  者:
郑淑婷;臧彧伟;杨龙;李伟
单  位:
长江大学生命科学学院
关键词:
转铁蛋白;黄鳝;重组表达;抑菌作用;
摘  要:
以黄鳝(Monopterus albus)肝脏c DNA为模板,利用RACE-PCR扩增了黄鳝转铁蛋白Tf基因5’和3’c DNA末端,构建了Tf基因N端原核表达载体;转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后经过Ni-NTA His·Bind Resin亲和柱分离纯化获得Tf-N蛋白;利用琼脂糖扩散抑菌圈法验证Tf-N蛋白的抑菌作用;分析了Tf-N蛋白对黄鳝肠道假单胞杆菌(Pseudomonas spp.)铁获取作用的影响。结果显示:成功克隆了黄鳝Tf基因全长,构建了pET28a/Tf-N重组表达载体,获得了纯化的Tf-N蛋白;Tf-N蛋白可抑制假单胞杆菌的生长,能与假单胞菌来源的Bfr蛋白一起共同促进假单胞杆菌的生长。该研究结果可为进一步探索鱼类Tf基因的功能提供参考。

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