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Position: Home > Articles > Prokaryotic expression and antibody preparation of full-length and N-terminal half of SpTrz2 protein in Schizosaccharomyces pombe Acta Agriculturae Zhejiangensis 2021,33 (1) 34-42

粟酒裂殖酵母SpTrz2蛋白全长和N端的原核表达与多克隆抗体制备

作  者:
刘金玉;黄鹰
单  位:
长江大学生命科学学院;南京师范大学生命科学学院
关键词:
粟酒裂殖酵母;SpTrz2蛋白;原核表达;多克隆抗体
摘  要:
采用生物信息学方法分析粟酒裂殖酵母SpTrz2蛋白的生物学特性,利用PCR方法扩增粟酒裂殖酵母yAS56菌株SpTrz2的全长和N-末端一半的编码基因,通过NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点将SpTrz2的全长和N-末端一半编码基因定向插入pET-28a(+)原核表达载体中,并转化大肠埃希菌BL21(DE3);经过IPTG诱导表达后采用SDS-PAGE电泳切胶纯化法获得重组蛋白,以此为抗原免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,通过Western blotting检测抗体特异性.结果表明,SpTrz2是一个跨膜蛋白,含有3个跨膜结构域,具有多个B细胞抗原表位.SDS-PAGE电泳分析发现,粟酒裂殖酵母SpTrz2的全长和N-末端一半(SpTrz2和SpTrz2N)都以包涵体形式高效表达,其理论相对分子质量分别约为75.99 ku和44.77 ku.Western blotting检测显示,制备的兔抗SpTrz2和SpTrz2N多克隆抗体可以特异性识别天然的SpTrz2蛋白.本研究成功诱导表达、纯化重组蛋白SpTrz2和SpTrz2N,并制备了多克隆抗体,为SpTrz2蛋白的生物学功能相关研究奠定了基础.
译  名:
Prokaryotic expression and antibody preparation of full-length and N-terminal half of SpTrz2 protein in Schizosaccharomyces pombe

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