武琳琳;张衡;李世杰;马兴红

东北农业大学生命科学学院

细胞剔除;白喉毒素;白喉毒素受体;Cre/+小鼠','') >PRCre/+小鼠;pCAG-loxp-STOP-loxp-DTR-2A-EGFP小鼠

为了研究体内细胞的功能和各种细胞之间的相互作用,试验研究了可以特异性消除特定细胞的条件性细胞剔除新方法.通过PRCre/+工具鼠与pCAG-loxp-STOP-loxp-DTR-2A-EGFP转基因小鼠(DTR小鼠)交配获得子宫特异表达白喉毒素受体(DTR)的转基因小鼠,经过PCR和琼脂糖凝胶电泳鉴定基因后,筛选出PRCre/+/pCAG-loxp-STOP-loxp-DTR-2A-EGFP雌性小鼠(PR-DTR小鼠).以DTR小鼠和野生型小鼠(WT小鼠)作为试验对照组,利用免疫组织化学和Western blotting检测子宫中绿色荧光蛋白(GFP)的表达.腹腔注射白喉毒素1 ng/d,连续2 d,观察PR-DTR小鼠、DTR小鼠和WT小鼠子宫的外部形态差异,并通过HE染色的方法观察子宫的内部形态.使用免疫组织化学方法检测注射白喉毒素后PR-DTR小鼠、DTR小鼠和WT小鼠子宫中叉头框蛋白A2(FOXA2)的表达.试验发现在小鼠子宫上皮、基质和肌层细胞中都有GFP的表达,注射白喉毒素后PR-DTR小鼠子宫红肿膨胀,DTR小鼠和WT小鼠子宫没有显著变化.HE染色试验结果发现,PR-DTR小鼠子宫中出现异常空腔,而DTR小鼠和WT小鼠子宫没有明显变化,并且对注射白喉毒素的PR-DTR小鼠子宫中FOXA2表达的检测结果表明,这些异常的空腔不属于腺体,说明白喉毒素使细胞死亡,证实在小鼠子宫中表达孕酮受体的细胞表达了DTR.试验结果表明,白喉毒素在PR-DTR小鼠子宫中可以条件性剔除子宫中表达孕酮受体的细胞,为研究子宫细胞的功能以及子宫细胞相互之间的作用提供了新方法.