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Position: Home > Articles > 木薯V型几丁质酶MeCHITVb基因克隆及其表达载体构建 Molecular Plant Breeding 2021 (21) 7113-7121

木薯V型几丁质酶MeCHITVb基因克隆及其表达载体构建

作  者：
丁云;陈松笔;李开绵;蔡杰
单  位：
海南大学园艺学院;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所农业农村部木薯种质资源保护与利用重点实验室
关键词：
木薯（Manihot esculenta Crantz）;V型几丁质酶;植物表达载体;抗寒性;
摘  要：
几丁质酶在生物逆境环境和非生物逆境环境中发挥着重要作用。为研究木薯几丁质酶在响应低温胁迫下的分子作用机制,利用RT-PCR技术,从木薯耐低温品种SC124中克隆到CHITVb基因,利用平末端连接技术构建pEASY-MeCHITVb克隆载体,用于测序确定目标基因序列,并对其序列进行分析,构建植物表达载体。结果表明,成功克隆木薯CHITVb基因,命名为MeCHITVb。通过生物信息学分析,该基因全长1 050 bp,编码349个氨基酸,理论相对分子量为38.08 kD,理论等电点为4.53,是一种稳定蛋白。经序列比对和系统进化树分析表明,MeCHITVb基因与烟草、拟南芥V型几丁质酶基因亲缘关系最近。用pEASYMeCHITVb与植物表达载体pISV2678构建重组子pISV-MeCHITVb,利用"Golden Gate"克隆方法构建基因编辑载体CRISPR/Cas9-MeCHITVb。将植物过表达的pISV-MeCHITVb和CRISPR/Cas9-MeCHITVb载体成功转化为根状杆菌LBA4404。本研究为后续MeCHITVb基因功能研究、木薯抗寒、抗病品种的选育及木薯北移栽培提供理论依据。

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