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当前位置: 首页 > 文章 > 美洲大蠊变应原CrPI的表达、纯化与免疫学特性鉴定 昆虫学报 2005,48 (1) 13-17
Position: Home > Articles > Expression, purification and characterization of the American cockroach Cr PI allergen Acta Entomologica Sinica 2005,48 (1) 13-17

美洲大蠊变应原CrPI的表达、纯化与免疫学特性鉴定

作  者：
高波;刘志刚;邢苗;徐宏;罗时文;赖仞
单  位：
深圳市微生物基因工程重点实验室;深圳大学生命科学学院
关键词：
美洲大蠊;重组变应原CrPI;蛋白表达;亲和层析;免疫印迹
摘  要：
以阳性噬菌体克隆为模板 ,通过PCR扩增出目的基因片段并克隆入T载体 ,经测序证实为美洲大蠊Periplanetaamericana变应原CrPI后 ,将该基因亚克隆入表达载体pGEX 5X 1。美洲大蠊变应原CrPI在大肠杆菌中得到高效表达 ,但主要以包涵体形式存在于沉淀中。目的蛋白溶于 6mol L盐酸胍并经稀释复性后 ,经GlutathioneSepharoseTM 4B亲和层析 ,纯度达 90 %以上。以蟑螂过敏病人血清进行免疫印迹检测 ,结果显示重组变应原具有良好的IgE结合活性。
译  名：
Expression, purification and characterization of the American cockroach Cr PI allergen
作  者：
GAO Bo~1, LIU Zhi-Gang~(1,2*), XING Miao~(1,2), XU Hong~2, LUO Shi-Wen~2, LAI Ren~2 (1.College of Life Sciences,Shenzhen University,Shenzhen,Guangdong 518060, China; 2. Shenzhen Key Laboratory of Microbial Genetic Engineering, Shenzhen, Guangdong 518060, China)
关键词：
American cockroach; Periplaneta americana; recombinant allergen Cr PI; protein expression; affinity chromatography; Western blotting
摘  要：
Using the Cr PI clone from the λEXcell library as a template, the cDNA fragments were first generated by PCR techniques and then ligated into T vector. After being confirmed by DNA sequencing, the cDNA encoding the American cockroach Cr PI allergen was subcloned into pGEX-5X-1 and expressed as GST-fusion protein in the form of inclusion bodies. After being dissolved in 6 mol/L guanidine hydrochloride and renatured with a simple dilution method, the proteins of target were purified to above 90% purity by affinity chromatography with Glutathione Sepharose 4B. Tested with sera from subjects allergic to cockroach, the recombinant allergen was shown to possess good IgE-binding activity as determined by Western blotting.

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