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Position: Home > Articles > 大叶落地生根酵母cDNA文库的构建及KdSAHH基因自激活检测 Acta Agrestia Sinica 2021 (10) 2135-2140

大叶落地生根酵母cDNA文库的构建及KdSAHH基因自激活检测

作  者:
张珂;王梦迪;董笛;胡乃文;晁跃辉;曾会明
单  位:
北京林业大学草业与草原学院
关键词:
大叶落地生根;酵母杂交技术;cDNA文库;KdSAHH基因;诱饵载体;自激活检测;
摘  要:
大叶落地生根(Kalanchoe daigremontiana)主要以叶缘凹陷处产生不定芽的方式实现高效再生,是研究无性繁殖的模式植物。为筛选大叶落地生根不定芽发育过程中重要调控蛋白的互作因子,本研究提取大叶落地生根不同组织来源的植物RNA,利用RNA反转录5′末端交换机制(Switching mechanism at 5′end of RNA transcript, SMART)建库技术和双链特异性核酸酶(Duplex-specific nuclease, DSN)均一化处理技术,构建大叶落地生根酵母cDNA杂交文库,同时构建诱饵载体pGBKT7-KdSAHH,并用营养缺陷法检测其自激活活性。对文库进行质量检测的结果显示:文库滴度为3.2×106 CFU·mL-1,文库总容量为4.8×107 CFU,插入片段长度在250~2 000 bp范围内,重组率为91.7%。诱饵载体pGBKT7-KdSAHH构建成功且在酵母中无转录自激活活性。本研究为后续利用酵母杂交技术筛选大叶落地生根KdSAHH基因的互作蛋白提供基础。

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