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Position: Home > Articles > 桑脉带相关病毒N蛋白多克隆抗体的制备 Acta Phytopathologica Sinica 2022 (2) 138-144

桑脉带相关病毒N蛋白多克隆抗体的制备

作者：

李雨珈;李杨秀;王宇宁;赵鑫茹;陈保善;蒙姣荣

单位：

广西大学农学院;广西大学生命科学与技术学院

关键词：

桑脉带相关病毒;核外壳蛋白;原核表达;多克隆抗体;

摘要：

桑脉带相关病毒（Mulberry vein banding associated virus,MVBaV）属于番茄斑萎病毒科（Tospoviridae）正番茄斑萎病毒属（Orthotospovirus）的新成员，是广西桑树病毒病的主要病原病毒。本研究将MVBaV核外壳蛋白（nucleocapsid protein, N protein）基因连接到pET-30a原核表达载体上，获得重组表达载体pET-30a-MVBaV-N并转化大肠杆菌菌株BL21（DE3）,经IPTG诱导可表达产生一个含His标签、分子量约36.0 kDa的融合蛋白。用Ni²⁺-NTA树脂纯化融合蛋白，将其免疫日本大耳兔制备多克隆抗体。间接ELISA测定抗体的效价为1∶256 000。Western blot检测结果显示，该多克隆抗体在稀释倍数1∶1 000时与细菌表达的融合N蛋白及感病桑叶中的N蛋白产生特异性识别，但不与寄主蛋白产生交叉反应，表明具有良好的特异性和较高的灵敏度。将抗体按1∶2 500稀释后进行间接ELISA,可有效检出桑叶中的MVBaV。MVBaV N蛋白抗体的成功研制，为桑脉带病毒病的诊断及MVBaV与寄主相互作用机制的研究提供了重要的试剂。

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