谢晶晶;任梦婷;范佳慧;焦亚茹;韩宗玺;马得莹

兽医生物技术国家重点实验室;东北农业大学动物科学技术学院

传染性支气管炎病毒（IBV）;鸡;Toll样受体;禽β-防御素;抗病毒作用

【目的】探究呼吸型传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus, IBV）对蛋鸡免疫反应的影响及重组禽β-防御素（avian β-defensins, AvBDs）的抗病毒作用。【方法】试验将70只7日龄SPF白来航鸡随机分为2组，每组35只。攻毒组通过滴鼻点眼途径接种呼吸型IBV强毒（CK/CH/LSD/05I）,对照组以相同途径接种等剂量灭菌PBS。定时观察临床症状14 d并记录，在攻毒后12 h、36 h、3 d、7 d和14 d 2组各随机选取5只鸡心脏采血处死，检测血清抗体水平并收集部分气管和肾脏进行组织病理学检测。采集法氏囊、脾脏、肾脏和气管，提取RNA,运用实时荧光定量PCR方法检测组织中IBV的病毒载量、Toll样受体（Toll-like receptors, TLRs）及信号转导分子、AvBDs基因表达量变化。将重组AvBD11和AvBD12转染鸡胚肾细胞（chicken embryo kidney, CEK）并在病毒感染细胞后6、12、24、36和48 h收取细胞上清和细胞用于提取RNA,通过实时荧光定量PCR方法检测病毒载量。【结果】感染呼吸型IBV强毒后，鸡出现轻微呼吸道症状，剖检无明显病理变化。在感染14 d后，鸡血清抗体水平转阳且阳性率为100%。实时荧光定量PCR结果显示，对照组均未检测到病毒，攻毒组仅在感染14 d后的气管中检测到病毒且病毒载量低。与对照组相比，攻毒组脾脏中TLR1、TLR5、AvBD9和AvBD12基因表达量在感染后7 d均显著升高（P＜0.05）,攻毒组法氏囊中TLR1、TLR2、TLR3、AvBD5和AvBD9基因表达量及气管中核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、NF-κB c-Rel、AvBD5、AvBD9、AvBD11和AvBD13基因表达量在感染14 d后均显著升高（P＜0.05）。体外抗病毒结果显示，与转染空载体组相比，转染AvBD11的CEK细胞在感染24和48 h后病毒载量显著下调（P＜0.05）,细胞上清的病毒载量在感染48 h后显著下调（P＜0.05）;转染AvBD12的CEK细胞在感染12和24 h后病毒载量显著下调（P＜0.05）,细胞上清的病毒载量在感染12和48 h后显著下调（P＜0.05）,说明重组AvBD11和AvBD12在CEK细胞中具有抗IBV活性。【结论】呼吸型IBV强毒感染机体后增强了相关受体的基因表达和信号转导，上调了AvBDs基因表达，加强了机体免疫反应。重组AvBD11和AvBD12具有抗病毒作用，为无抗饲料的配制及研究提供了新思路。