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3种食源性致病菌TaqMan多重荧光定量PCR检测方法的建立

作  者:
王华健;张宁;杨威;赵志强;李茜;陆安;田勇;何欣;赵兴华;李杰峰
单  位:
河北省畜牧兽医研究所;河北农业大学;石家庄市金元康牧药业有限公司;河北农业大学动物医学院
关键词:
食源性致病菌;多重荧光定量PCR;检测方法;大肠杆菌O157 ∶ H7;沙门菌;产单核细胞李氏杆菌
摘  要:
旨在建立一种可同时快速检测大肠杆菌O157 ∶ H7、沙门菌和产单核细胞李氏杆菌3种食源性致病菌的TaqMan多重荧光定量PCR(qPCR)方法.针对大肠杆菌O157 ∶ H7 rfbE基因、沙门菌invA基因和产单核细胞李氏杆菌hlyA基因的保守序列分别设计特异性引物和TaqMan探针,建立多重qPCR反应体系,进行特异性、灵敏性和重复性试验,应用建立的方法检测生鲜食品中致病菌并与国家标准方法对比.结果显示:建立的多重qPCR方法特异性好,只扩增3种靶细菌;灵敏性最低检测值均为104 copies·μL-1;重复性良好,批内变异系数为0.09%~2.97%,批间变异系数为0.23%~7.82%;对120份生鲜肉样品进行检测对比,两种方法均检出2份大肠杆菌O157:H7,21份产单核细胞李氏杆菌,多重qPCR方法检出14份沙门菌,比国标法多检出1份,建立的方法可检出所有受污染样品.综上表明,建立的多重qPCR检测方法能快速、准确检测食品中大肠杆菌O157 ∶ H7、沙门菌和产单核细胞李氏杆菌3种食源性致病菌,为食品安全提供技术保障.
译  名:
Establishment of a Multiplex TaqMan Fluorescence Quantitative PCR Method for Detection of Three Foodborne Pathogens

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