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BHV-1感染牛巨噬细胞对CD300a转录的影响

作  者:
王旭芬;安冬;侯琳;赵润涛;张贺;赵洋;张志丹;周伟光
单  位:
内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室;呼伦贝尔市海拉尔区疫病预防控制中心
关键词:
传染性鼻气管炎;牛Ⅰ型疱疹病毒;CD300a;荧光定量PCR;单核巨噬细胞
摘  要:
为探究抑制性受体CD300a在牛Ⅰ型疱疹病毒(bovine herpesvirus 1,BHV-1)免疫调控机制中的作用,分离鉴定了1株BHV-1内蒙古株,并建立CD300a基因的荧光定量PCR方法,检测BHV-1感染牛单核巨噬细胞后0,6,12,24,48,72 h 6个时间点以及空白对照组CD300a基因的转录变化。将β-actin基因作为内参,使用双标准曲线法计算攻毒组与对照组CD300a基因各时间段的相对表达量,分析CD300a在攻毒前、后的表达差异。结果显示,BHV-1分离株在MDBK细胞上出现典型细胞病变效应,测得其病毒滴度为107.23 TCID50/mL。本研究建立的CD300a基因荧光定量PCR检测方法,CD300a基因和β-actin基因标准品的Ct值与模板浓度之间均具有良好的线性关系,溶解曲线均为特异单峰,最低检测限均为10拷贝/μL,具有良好的灵敏性,可以准确检测出BHV-1攻毒后巨噬细胞内的CD300a基因表达量。经计算,攻毒组CD300a表达量均高于对照组,其中,6,12,24 h的表达差异倍数显著高于0,72 h (P<0.05),表达差异倍数在12 h时达到最高,且显著高于其他各组(P<0.05),表达差异倍数从6 h时开始巨幅增长,12 h达到最大,48 h开始趋于稳定。结果表明CD300a基因作为巨噬细胞表面的抑制性受体,表达量在BHV-1入侵时会显著变化,推测CD300a基因为协助病毒进入宿主细胞或免疫逃逸也相应增多,在抗病毒免疫机制中起到一定作用。

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