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鼠伤寒沙门菌Hfq依赖型sRNA GcvB对Ⅲ型分泌系统相关基因调控作用的研究

作者：

段世宇;杨阳;张家莉;潘永;杨琦;周碧君

单位：

贵州大学动物科学学院

关键词：

鼠伤寒沙门菌;sRNA;同源重组;Hfq;Ⅲ型分泌系统;

摘要：

试验旨在研究鼠伤寒沙门菌伴侣蛋白Hfq依赖型sRNA GcvB对spaP和invC基因mRNA所具有的调控作用。利用λ-Red同源重组技术构建spaP和invC基因LacZ融合菌株,并利用P₂₂噬菌体转导技术分别构建GcvB和Hfq基因单缺失和双缺失菌株及GcvB功能区域缺失株,通过β-半乳糖苷酶活性试验测定在伴侣蛋白Hfq、sRNA GcvB及Hfq&GcvB缺失株中spaP和invC基因β-半乳糖核苷酶活性;实时荧光定量PCR测定spaP和invC基因mRNA表达量。结果显示,利用P₂₂噬菌体转导技术成功构建出ΔGcvB（696 bp）、ΔHfq（2 369 bp）、ΔGcvBΔHfq（2 369/696 bp）、GcvBΔR1（757 bp）、GcvBΔR2（951 bp）、GcvBΔR3（986 bp）缺失株;β-半乳糖苷酶活性检测结果显示,与野生型菌株相比,spaP基因β-半乳糖核苷酶活性在缺失株GcvBΔR2、GcvBΔR3中极显著下调（P<0.01）,在缺失株ΔGcvB、ΔHfq、ΔGcvBΔHfq、GcvBΔR1中极显著上调（P<0.01）;而invC基因β-半乳糖核苷酶活性在缺失株GcvBΔR2、GcvBΔR3中极显著下调（P<0.01）,在缺失株GcvBΔR1中显著下调（P<0.05）,在缺失株ΔGcvB、ΔHfq、ΔGcvBΔHfq中极显著上调（P<0.01）。实时荧光定量PCR结果显示,与野生型菌株相比,spaP基因在ΔGcvB、ΔHfq、ΔGcvBΔHfq和GcvBΔR1缺失菌株中转录水平极显著上调（P<0.01）,而GcvBΔR2缺失菌株转录水平极显著下调（P<0.01）,GcvBΔR3缺失菌株转录水平显著下调（P<0.05）,invC基因ΔGcvB、ΔHfq、ΔGcvBΔHfq缺失菌株转录水平极显著上调（P<0.01）,GcvBΔR1、GcvBΔR2缺失菌株均极显著下调（P<0.01）,GcvBΔR3缺失菌株均显著下调（P<0.05）。通过以上试验结果得出,sRNA GcvB及伴侣蛋白Hfq对invC和spaP基因存在一定的调控作用。本试验结果为sRNA GcvB及伴侣蛋白Hfq调控提供了理论依据,丰富了GcvB的靶基因数目。

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