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当前位置: 首页 > 文章 > 二温式PCR在特异短核酸探针合成中的应用 花生学报 2008,37 (3) 7-12
Position: Home > Articles > Synthesis of Specific and Short RNA Probes with Two-temperature PCR Journal of Peanut Science 2008,37 (3) 7-12

二温式PCR在特异短核酸探针合成中的应用

作  者：
董倩;黄国强;叶冰莹;陈由强;陈如凯
单  位：
福建师范大学生命科学学院;福建师范大学福清分校生物与化学工程系;福建农林大学甘蔗综合研究所;农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点开放实验室
关键词：
二温式PCR;花生;白藜芦醇合酶;核酸探针
摘  要：
经基因库序列比对确定花生白藜芦醇合酶基因(RS)中的特异序列(长度约108 bp)。以此为模板设计分别含有SalI和SacI酶切位点的一对上、下游引物,并应用二温式PCR扩增得到该特异短片段。将该特异片段正向连接到pBlueskriptIIKS(+)的多克隆位点上,利用T7 RNA聚合酶在体外转录合成地高辛标记的反义特异短核酸探针。该特异短核酸探针的合成为后续RS基因在花生组织器官中表达的RNA原位杂交研究打下了基础。
译  名：
Synthesis of Specific and Short RNA Probes with Two-temperature PCR
作  者：
DONG Qian1,3,HUANG Guo-qiang2,3,YE Bing-ying4,5,CHEN You-qiang3,4,5,CHEN Ru-kai2,3(1.Department of Biology and Chemistry,Fuqing Branch of Fujian Normal University,Fuqing 350300,China;2.Institute of Sugarcane,Fujian Agricultural and Forestry University,Fuzhou 350002,China;3.Key Laboratory of Sugarcane Eco-Physiology & Genetic Improvement,Ministry of Agriculture,Fuzhou 350002,China;4.College of Life Sciences,Fujian Normal University,Fuzhou 350108,China;5.State Key Laboratory of Developmental Biology and Neurobiology,Fuzhou 350108,China)
关键词：
Two-temperature PCR;Arachis hypogaea L.;Resveratrol Synthase
摘  要：
The Arachis hypogaea resveratrol synthase(RS) mRNA specific fragment was determined by NCBI BLAST.Primers with the two restriction enzymes of Sal I or Sac I were designed and two-temperature PCR was used to amplify the specific and short fragment.The fragment was eventually linked to the multiple cloning site of vector pBlueskript II KS(+).By means of the T7 promoter in the pBlueskript II KS(+) and using the specific fragment as a templet to synthesize Digoxigenin-labeled antisense specific and short RNA probe in vitro transcription with T7 RNA polymerases.The synthesis of probes laid a foundation for the research of the expression of RS gene in peanut by RNA in situ hybridization.

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