郭悦;李颜;王程程;张洁;张飞扬;党晓群;周泽扬

农业农村部长江上游传粉昆虫资源保护与利用重点实验室

柔软表皮蛋白;中华蜜蜂;中蜂囊状幼虫病毒;原核表达;RNA干扰

【目的】昆虫的表皮是维持昆虫形态、抵御病原以及外界环境变化的主要保护屏障。本研究旨在通过RNA干扰（RNA interference,RNAi）检测中华蜜蜂Apis cerana cerana柔软表皮蛋白flexible cuticle protein 12 （FCP12）对CSBV病毒感染的影响。【方法】采用生物信息学分析鉴定AcFCP12序列特征，通过qRT-PCR检测CSBV感染前后中蜂AcFCP12的转录水平；通过原核表达系统对中华蜜蜂AcFCP12进行表达、纯化及其抗体制备；利用L4440载体表达双链ds AcFCP12，采用RNAi干扰技术下调中蜂幼虫AcFCP12的表达，再对其进行CSBV病毒感染实验，通过qRT-PCR检测AcFCP12和CSBV衣壳蛋白基因VP1的表达量，分析CSBV病毒感染与中蜂表皮蛋白AcFCP12的相关性。【结果】生物信息分析表明，中蜂AcFCP12包含一个几丁质结合域，具有RR1基序，表明该基因编码柔软表皮蛋白。qRT-PCR结果显示，AcFCP12在CSBV病毒感染24 h和48 h分别下调了86%和40%。通过原核克隆表达成功获得约12 kD的AcFCP12重组蛋白并制备了特异性较好的鼠多克隆抗体。利用L4440载体系统成功获得AcFCP12的双链RNA,RNAi实验表明，AcFCP12基因表达下调了65%。通过下调AcFCP12表达后再进行CSBV病毒感染，qRT-PCR结果显示CSBV的VP1基因表达量显著增加了33%。【结论】CSBV病毒感染中蜂引起AcFCP12表达量降低，下调AcFCP12表达后导致CSBV病毒增殖加剧，表明中华蜜蜂AcFCP12在抵御CSBV感染时发挥重要作用，研究结果为阐明CSBV病毒对中蜂的感染机制奠定基础。