闫可心;闫宗斌;韩金成;薛书江;于龙政;宋建臣;许应天

延边大学农学院

细胞穿膜肽（CPPs）;基因转化;牛瑟氏泰勒虫;p33基因;

为了弥补常规基因转化法存在的缺点,本研究采用琼脂糖凝胶电泳分析法探讨了细胞穿膜肽（cell penetrating peptides, CPPs）与DNA的最适比例,用转化率探讨了CPPs-DNA复合物的制备条件、保存条件和解冻条件等对CPPs基因转化的影响,再用CPPs基因转化法进行了牛瑟氏泰勒虫p33基因的克隆与原核表达,进一步验证CPPs基因转化的可行性。结果表明,CPPs与质粒pMD19-T最适电荷比为16∶1;CPPs-DNA复合物的最适制备条件为室温孵育30 min;将培养液D₆₀₀约为0.6的大肠杆菌菌液在-20℃冰箱保存3月的转化率为（5.58±0.19）×10⁵ CFU/μg,仍符合常规转化要求。按照所优化的条件成功地克隆与表达了牛瑟氏泰勒虫p33基因。本研究结果将为基因转化提供一种新方法。