梁青青;程慧芳;申志超;张红垒

汝阳县农产品质量安全检测站;汝阳县农业技术推广中心;河南农业大学动物医学院

猪信号转导与转录激活因子1（STAT1）;克隆;真核表达;ST细胞;

为研究STAT1基因在ST细胞上的表达情况,笔者参考NCBI中多个物种的STAT1基因,把比对后显示序列保守的区域进行引物设计并进行合成。提取ST细胞的RNA,通过试剂盒进行反转录获得目的 cDNA,再进行聚合酶链式反应（PCR）,放大扩增猪的全长STAT1基因片段,对目的基因进行克隆、序列比对以及遗传进化分析。用内切酶Xhol和BamHI对测序无误的重组质粒pEGFP-STAT1进行双酶切,分离、纯化,与相同方法处理后的pEGFP-N1载体在适宜环境下进行体外连接,构建包含目的基因的重组质粒,进行双酶切、序列测定,之后再转染至ST细胞,运用West ern bl ot进行目的基因的蛋白检测来了解其表达情况。同等环境下猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）感染ST细胞,qPCR检测不同接毒时间下ST细胞中STAT1的表达情况。结果表明,猪STAT1基因大小为2.274 kp;构建的重组真核表达质粒pEGFP-STAT1转染ST细胞后,West ern bl ot检测到特异性的目的蛋白;ST细胞被TGEV感染后,STAT1的m RNA表达起始于6 h,到12 h一直持续表现为低表达,于24 h时达到对照组的6.8倍,为峰值。结果提示,猪STAT1在进化上相对保守,构建重组质粒能在ST细胞中成功表达,且STAT1信号通路在TGEV感染细胞后被激活。本试验为进一步研究猪STAT1的基因在机体中的表达与调控提供了参考依据。