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新型鹅星状病毒一步法RT-PCR检测方法的建立与应用

作  者:
肖亦辰;杨颖;马平;赵冬敏;章丽娇;刘青涛;杨婧;李银;刘宇卓;韩凯凯;黄欣梅
单  位:
江苏省农业科学院兽医研究所
关键词:
新型鹅星状病毒;一步法RT-PCR;鉴别诊断;鹅痛风病;敏感性试验;临床样品检测
摘  要:
新型鹅星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)感染引起的鹅痛风病,是近年严重危害我国养鹅业的传染病之一,给我国养鹅产业造成严重经济损失,快速准确诊断有助于更好地防控该病.为了建立一种鉴定新型GoAstV的一步法RT-PCR方法,根据新型GoAstV ORF2基因序列设计特异性引物,构建质粒标准品,并对引物用量和退火温度等反应体系和条件进行了优化.结果表明,该方法能特异性扩增新型GoAstV 512 bp基因片段,其他鹅常见病毒性病原扩增结果均为阴性,具有较高的特异性.敏感性试验结果提示,最小检测限量达4.54×102拷贝/μL.此外,该方法重复性良好,应用所建立的方法对新型GoAstV临床样品进行检测,102份鹅泄殖腔拭子的阳性率为46.08%,24份痛风症状患病鹅内脏样本阳性率为91.70%.本研究建立的新型GoAstV一步法RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,且操作简便、经济、快速,可用于新型GoAstV的临床鉴别诊断和流行病学调查.

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