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A型塞内卡病毒VP2蛋白阻断ELISA检测方法的建立

作  者:
申珊;许立阳;李蕊;史雪坤;王慧青;苗天姿;马玉忠;秦建华;袁万哲;汪恩强
单  位:
河北农业大学;河北旅游职业学院动物医学院
关键词:
猪;A型塞内卡病毒;VP2蛋白;单克隆抗体;阻断ELISA;特异性
摘  要:
为了建立一种检测A型塞内卡病毒(SVA)VP2蛋白抗体的阻断ELISA方法,试验用SVA VP2蛋白作为抗原包被酶标板,采用棋盘法确定最佳蛋白包被浓度和单克隆抗体最佳稀释倍数.同时对阻断ELISA的其他条件(封闭液、血清稀释度、底物反应条件)进行优化,对方法的特异性和重复性进行考察.结果表明:VP2蛋白最佳包被浓度为0.5μg/mL;最佳封闭液为2%BSA,每孔200μL,37℃封闭1 h;待检血清最佳稀释度为1∶1,在37℃条件下作用1 h;单克隆抗体最佳稀释度为1∶40 000,在37℃条件下作用1 h;底物最佳反应条件为室温避光10 min.特异性试验结果显示,SVA阳性血清与猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综征病毒、猪瘟病毒、猪口蹄疫病毒、猪流行性腹泻病毒阳性血清均无交叉反应.批间、批内重复性试验结果的变异系数均小于10%.对200份猪血清样本进行荧光抗体中和试验和阻断ELISA方法检测,符合率为96.0%.说明该ELISA方法具有良好的特异性和重复性,可用于塞内卡病毒血清抗体检测和流行病学调查.

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