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Position: Home > Articles > cDNA cloning and prokaryotic expression of β-N acetylglucosaminidase from Xestia c-nigrum Plant Protection 2011,37 (5) 50-55

八字地老虎β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因cDNA序列的克隆及原核表达研究

作者：

樊东;高艳玲;郭博智;韩岚岚;周长梅;王晓云;刘健

单位：

东北农业大学农学院

关键词：

八字地老虎;β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶;克隆;原核表达;纯化

摘要：

[目的]克隆八字地老虎β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因的cDNA序列并进行原核表达。[方法]以八字地老虎预蛹期幼虫为材料提取总RNA,利用RT-PCR和RACE技术克隆基因cDNA序列,将cDNA序列编码区连接到原核表达载体pET21b并转化BL21进行原核表达,并使用His-tag纯化试剂盒将目的蛋白进行纯化。[结果]得到cDNA全长序列,含有2 488个碱基,包括一个1 785个碱基的开放阅读框,编码一个含594个氨基酸的蛋白,分子量为67.8 ku,等电点5.38,该序列登录GenBank并获得登录号FJ848784。诱导表达蛋白经SDS-PAGE电泳得到目的蛋白带,纯化结果也获得了目的蛋白带。[结论]获得了一条新的八字地老虎β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因的cDNA序列并对其在原核表达系统中进行了成功表达和纯化。

译名：

cDNA cloning and prokaryotic expression of β-N acetylglucosaminidase from Xestia c-nigrum

作者：

Fan Dong,Gao Yanling,Guo Bozhi,Han Lanlan,Zhou Changmei,Wang Xiaoyun,Liu Jian(Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China)

关键词：

Xestia c-nigrum;β-N-acetylglucosaminidase;cloning;prokaryotic expression;purification

摘要：

[Objective] To clone β-N-acetylglucosaminidase cDNA sequence from Xestia c-nigrum Linnaeus and express this sequence in prokaryotic expression system.[Methods] Total RNA was isolated from the prepupal X.c-nigrum.The cDNA sequence was cloned by RT-PCR and rapid amplification of cDNA ends(RACE).The encoding region was subcloned into the expression vector pET21b and expressed in BL21 cells.The recombinant protein with 6×His tag was purified.[Results] The β-N-acetylglucosaminidase full-length cDNA sequence was obtained.The cDNA sequence of 2 488 base pairs in length contained an open reading frame of 1 785 base pairs,encoding for a polypeptide of 594 amino acid residues,with a predicted molecular weight of 67.8 ku and pI 5.38.The cDNA sequence has been deposited in GenBank with accession No.FJ848784.[Conclusion] A novel β-N-acetylglucosaminidase cDNA sequence was successfully cloned,expressed and purified from Xestia c-nigrum.

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