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内江猪γ干扰素基因的克隆、序列分析及真核表达载体的构建

作者：

黄亚平;郭万柱;李晓琪

单位：

四川农业大学动物生物技术中心

关键词：

γ干扰素;克隆;序列分析;真核表达载体构建

摘要：

将内江猪的外周血淋巴细胞在刀豆素(ConA)的刺激下培养24 h后,提取总RNA,应用一步法RT-PCR扩增γ干扰素(IFN-γ)cDNA,克隆到PMD18-T载体,命名为pMD-N-IFN-γ,测序结果证明克隆的cDNA全长603 bp,其ORF为501bp,编码166个氨基酸,与Genbank公布的IFN-γ比对,核苷酸同源性在99.4%以上,从而证实成功地克隆了内江猪IFN-γ基因。以pMD-N-IFN-γ质粒为模板亚克隆完整ORF区,连接到真核表达质粒pcDNA3.1(+)的EcoRI、XhoI两位点之间,经单双酶切鉴定,成功的构建了IFN-γ真核表达载体pcDNA3.1(+)-N-IFN-γs。

译名：

Molecular Cloning,Sequencing and Constructing Eukaryotic Expression Vector of Neijiang Pig IFN-γ

作者：

HUANG Ya-ping,GUO Wan-zhu,LI Xiao-qi(The Center of Animal Biotechnology,Sichuan Agriculture Univerisity,Yaan 625014,China)

关键词：

IFN-γ;cloning;sequencing;constructing eukaryotic expression vector

摘要：

Total RNA was isolated from neijiang pig peripheral blood lymphocytes which were stimulated with ConA.Then the pIFN-γ cDNA was amplified by reverse transcription polymerase chain reaction.The amplified fragment was cloned into vector pMD18-T named pMD-N-IFN-γ and then sequenced.It was found that the amplified fragment was consisted of 603 nucleotides,the ORF consisted of 501 nucleotides,encoding 166 amino acids,Neijang pig IFN-γ gene has more than 99.4% homology with other pigs on Genbank.Sub-cloning the ORF of pig IFN-γ gene,then the sub-cloned gene was successfully inserted between EcoRI and XhoI site of the eukaryotic expression vector pcDNA3.1(+),named pcDNA3.1(+)-N-IFN-γs.

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