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帕利亚姆病毒VP7蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

作者：

李占鸿;宋子昂;杨振兴;肖雷;李卓然;谢佳芮;李华春;杨恒

单位：

云南农业大学动物医学院;云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室

关键词：

帕利亚姆病毒;VP7蛋白;原核表达;多克隆抗体;

摘要：

本研究将帕利亚姆病毒（PALV）VP7蛋白的编码区序列插入原核表达质粒pET-32a（+）,构建出重组质粒pET32-PALV-VP7,转化大肠杆菌Rosetta（DE3）,以异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）进行重组蛋白的诱导表达。采用镍离子亲和层析进行重组蛋白的纯化,通过透析进行纯化蛋白的复性,采用Western-blot对复性后的蛋白进行鉴定。将纯化后的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA、Western-blot与间接免疫荧光对多克隆抗体的效价与反应原性进行分析。结果显示,在37℃与0.1 mmol/L IPTG诱导条件下,PALVVP7重组蛋白在大肠杆菌中得以高效表达,其分子质量约为43 ku,以包涵体形式存在,占菌体蛋白总量的30.4%。重组蛋白经纯化与复性处理后纯度达94.1%,Western-blot结果显示,复性后的重组蛋白可与PALV阳性血清发生特异性结合。ELISA检测结果显示,制备的家兔抗PALVVP7多克隆抗体效价可达1∶12 000。使用该多克隆抗体为一抗,可通过免疫荧光与Western-blot检测到PALV感染细胞中的VP7蛋白,表明抗体可特异性结合PALV的VP7蛋白。本研究成功在大肠杆菌中表达PALV VP7重组蛋白,并制备获得多克隆抗体,为PALV诊断试剂的开发奠定了基础。

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