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利用Red重组系统敲除大肠杆菌rnc基因构建dsRNA原核表达体系

作者：

尹国华;刘楠;孙兆楠;宋云枝;朱常香;温孚江

单位：

山东农业大学植物保护学院;山东农业大学作物生物学国家重点实验室;山东农业大学生命科学学院

关键词：

Red重组系统;重叠延伸PCR;RNaseIII缺失菌株;dsRNA;病毒抗性

摘要：

大肠杆菌的rnc基因编码产物为RNaseIII酶,RNaseIII酶能降解细菌中绝大多数dsRNA。利用来源于λ噬菌体的Red重组系统和重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR),敲除了大肠杆菌origami(DE3)菌株的rnc基因,获得了RNaseIII缺失型菌株M-origami。利用电激法,将构建的TMV运动蛋白基因(movement protein gene,MP)的dsRNA表达载体LMP480导入M-origami菌株中,IPTG诱导表达的结果显示:构建的M-origami/LMP480原核表达系统能高效表达TMV运动蛋白基因的dsRNA。初步的抗病性鉴定显示,表达的dsRNA能够诱发烟草对TMV的抗性。

译名：

KNOCK-OUT THE RNC GENE OF E COLI USING RED-MEDIATED RECOMBINATION FOR CONSTRUCTION OF DSRNA PROKARYOTIC EXPRESSION SYSTEM

作者：

YIN Guo-hua1,LIUNan2,SUN Zhao-nan2,SONGYun-zhi 3,ZHUChang-xiang3*,WENFu-jiang3*(1.College of Plant Protection,Shandong Agricultural University,Tai'an 271018,China;2.College of Life Sciences,Shandong Agricultural University,Tai'an 271018,China;3.College of Life Sciences,State Key Laboratory of Crop Biology,Shandong Agricultural University,Tai'an 271018,China)

关键词：

Red-mediated recombination;gene splicing by overlap extension PCR;RNaseIII-absented strains;dsRNA;virus resitance

摘要：

The rncgene of E.colican encode the RNaseIII protein which can degrade most of dsRNA transcripts in E.coli.Thernc gene of origami(DE3) strain usingλ-dependent Red-mediated recombination systemand gene splicing by overlap extension PCRand the M-origamistrain deficient for RNaseIII.wat And achieved the vector of LMP480 that can express TMV MP dsRNA transcripts was amstueted and transformed it intoM-origamistrain by electroporation.Induced by IPTG,M-origami/LMP480 strains couldeffectively express TMV MP dsRNA transcriptsand the dsRNA could protect tobacco from the infection of TMV.

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