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不同质粒载体对GFP单基因瞬时转染ExpiCHO-S细胞表达量的影响

作  者:
王妍;张超林;王娟;邓跃;苏晓蕊;谭菲菲;田克恭
单  位:
国家兽用药品工程技术研究中心;河南农业大学牧医工程学院
关键词:
GFP;CHO细胞;真核表达载体
摘  要:
[目的]ExpiCHO细胞瞬时表达能够快速有效地生产重组蛋白,为筛选有效的重组蛋白节省了大量的时间,细胞系的选择、表达载体的选择、转染试剂的选择等是制约ExpiCHO细胞瞬时表达蛋白的重要因素,本研究旨在筛选出在CHO细胞中瞬时表达量较高的载体.[方法]以GFP基因作为目的基因,用不同的真核表达载体构建GFP重组质粒,瞬时转染ExpiCHO-S细胞.转染后4 d观察不同载体表达GFP的荧光数量和强度;转染后8 d对细胞进行裂解,收获裂解上清,用SDS-PAGE对不同载体的表达量进行鉴定.同时用His Trap FF亲和层析柱对裂解上清中的GFP蛋白进行纯化,通过Western Blot比较不同载体GFP蛋白的表达量.[结果]pCDNA3.1-GFP、pCDNA3.4-GFP载体表达的荧光数量最多,pCIneo-GFP载体表达的荧光强度最强,pCMVHA载体表达的荧光数量最少,荧光强度最弱.SDS-PAGE和Western Blot结果均表明pCDNA3.1-GFP、pCDNA3.4-GFP、pCIneo-GFP重组质粒的蛋白表达量高于pCHO-GFP、pCMVHA-GFP重组质粒的蛋白表达量.[结论]筛选出表达量较高的真核表达载体pCDNA3.1、p CDNA3.4、pCIneo,为后续重组蛋白的瞬时表达载体选择提供依据.

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