刘峰;阮盈盈

宁波城市职业技术学院景观生态学院;宁波大学海洋学院

明日叶（Angelica keiskei）;EPSPS;草甘膦;抗性;

5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶（EPSPS）是莽草酸合成通路中关键的合成酶,也是除草剂草甘膦的靶向酶。为了研究明日叶EPSPS基因的结构及功能,基于明日叶转录组数据库信息,利用RT-PCR的方法克隆得到明日叶的EPSPS基因,命名为AgEPSPS,构建p ET-AgEPSPS原核载体,验证AgEPSPS基因功能。克隆得到明日叶AgEPSPS基因的ORF全长为1 578 bp,编码525个氨基酸,分子质量为55.83 kD,等电点为7.93。它与胡萝卜的EPSPS蛋白具有高度的同源性;AgEPSPS基因在明日叶的不同组织中均有表达,其中叶片中的表达量最高。在3 mmol/L的草膦水溶液处理后,AgEPSPS基因表达量明显上调,在24 h后表达量最高。在抗性试验中,含有重组的pET-AgEPSPS质粒的大肠杆菌可以在80 mmol/L草甘膦的液体LB培养基中生长,说明其具有一定的草甘膦抗性。