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检测鸡传染性支气管炎病毒GVI-1基因型毒株的实时荧光定量PCR方法建立

作  者:
陈淑琴;杜旭彬;鄢坤;廖凯;张成成;郭梦娇;吴艳涛;张小荣
单  位:
扬州大学兽医学院江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心
关键词:
鸡传染性支气管炎病毒;GVI-1基因型;实时荧光定量PCR;鉴别检测;
摘  要:
为快速鉴别GVI-1基因型鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)毒株与其他基因型毒株,根据IBV不同基因型毒株S1基因序列差异较大的区域设计特异性引物和探针,建立了检测GVI-1基因型毒株的实时荧光定量PCR(qPCR)方法。该方法在1.0×101~1.0×1010拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,相关系数(R2)为0.999;对质粒标准品的检测下限可达1.0×101拷贝/μL;与GI-1、GI-7、GI-13、GI-19和GI-28等其他基因型毒株和疫苗株均无交叉反应;组内和组间重复试验的变异系数均小于2.5%;应用该方法和常规PCR方法对人工感染雏鸡的口腔和泄殖腔棉拭子进行检测,2种方法的符合率为96.7%,且qPCR方法敏感性更高。结果表明,本研究建立的GVI-1基因型IBVqPCR检测方法灵敏度高,特异性强,可重复性好,可应用于GVI-1基因型IBV流行病学监测和临床分离株的快速筛查。

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