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Chinese Veterinary Science
2022,52
(2)
190-196
猪源IFN-λ3在CHO-S细胞中的表达及其抗口蹄疫病毒活性分析
作 者：
袁红;白兴文;李坤;李平花;孙普;宋雅丽;焦云娟;刘在新;卢曾军;李冬;包慧芳
单 位：
家畜疫病病原生物学国家重点实验室
关键词：
猪源IFN-λ3;表达;CHO-S细胞;口蹄疫病毒;抗病毒活性
摘 要：
为了探究猪源IFN-λ3蛋白能否在CHO-S悬浮细胞中表达以及表达蛋白的抗口蹄疫病毒(FMDV)活性,根据NCBI上的猪源IFN-λ3序列,构建真核表达载体pcDNA3.4-IFNλ3-His,将其转染至CHO-K1贴壁细胞中,用间接免疫荧光试验和Western-blot验证重组质粒是否表达IFN-λ3蛋白.将pcDNA3.4-IFNλ3-His转染至CHO-S悬浮细胞中大量制备IFN-λ3蛋白,用AKTA蛋白纯化系统纯化蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定纯化出的蛋白,用细胞毒性试验分析纯化蛋白是否具有细胞毒性,用实时荧光定量PCR、Western-blot和空斑试验三种方法研究纯化蛋白的抗FMDV活性.结果显示,重组质粒pcDNA3.4-IFNλ3-His在CHO-K1细胞中瞬时表达IFN-λ3,在CHO-S细胞中以分泌形式表达IFN-λ3;用AKTA系统能够纯化出纯度较高的IFN-λ3蛋白;纯化出的IFN-λ3对PK-15细胞无明显毒性,能够抑制FMDVRNA的复制、减弱病毒蛋白翻译活动以及降低子代病毒的生成.本研究为发展新型FMDV防控策略提供了新方向.
译 名：
Expression of porcine IFN-λ3 in CHO-S cells and analysis of its antiviral activity against foot-and-mouth disease virus
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